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產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的菌落計(jì)數(shù)法!

 用有利于梭狀芽孢桿菌恢復(fù)的培養(yǎng)基作為稀釋液,制備待測(cè)食品的系列稀釋液。

 
 
用無卵黃胰蛋白胨亞硫酸鐵檸檬酸鹽杯絲氨酸瓊脂Shahidi和Ferguson多黏菌素卡那霉素亞硫酸鹽瓊脂或新莓素血瓊脂對(duì)系列稀釋物進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。對(duì)于SICA和 SFA瓊脂,既可采用加人lmL稀釋液后倒平板的方法(lOmL培養(yǎng)基),也可在預(yù)先干燥或倒好的平板上進(jìn)行表面接種。新霉素血瓊脂平板應(yīng)預(yù)先倒好平板,干燥后進(jìn)行表面接種。所有平板在35或37:厭氧培養(yǎng)24h在MCA和SFA瓊脂上,可疑產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的菌落延黑色的(亞硫酸鹽還原 產(chǎn)生硫化鐵沉淀)。
 
 
在新霉素血(牛、馬或人血)瓊脂上,產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的菌落產(chǎn)生-圏狹窄的完全溶血帶(形成毒素),在溶血帶外又形成一圏狹窄的非完全溶血帶挑選可疑的產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿搿菌落,穿刺接種至含有0.3%瓊脂的硝酸鹽蛋白胨水試管,也可以在Willis乳糖卵黃牛乳瓊脂上劃線接種,預(yù)先將幾滴產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿繭的抗毐崠噴灑每個(gè)平板的一半,干燥后,在整個(gè)平板上劃線接種。還可以將可疑菡落在血瓊脂平板上劃線。
 
 
將硝酸鹽瓊脂試管及Willis和fiobbs培養(yǎng)基置37厭氧培養(yǎng)24h。血瓊脂平板置 于37需氧培養(yǎng)24h培養(yǎng)后,觀察硝酸鹽瓊脂中菌體的生長(zhǎng)情況(指菌體運(yùn)動(dòng)),并測(cè)試硝酸鹽的還原量選取Willis/Hobbs培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株進(jìn)行革蘭氏染色后鏡檢。產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌為革蘭氏染色陽性、不運(yùn)動(dòng)桿菌,并能還原硝酸鹽。
 
 
通過以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證:觀察WmWHobbs培養(yǎng)基上的菌落——產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌在平板無抗毒素的部分,菌落周圍有一圈霧狀帶,在有抗毒素的區(qū)域不形成霧狀帶。另外該菌可發(fā)酵乳糖在血瓊脂需氧培養(yǎng)時(shí),該菌不生長(zhǎng)。

 

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